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产品名称

GeneRead Library Quant System 试剂盒

产品型号
GeneRead Library Quant System
所属分类
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产品描述

GeneRead Library Quant System 试剂盒

用于qPCR定量检测NGS文库
 
  • 以芯片规格提供预分装的即用型、梯度稀释DNA标准品
  • 自动计算文库浓度
  • 实验方案简便、灵敏度高、动态范围宽
  • 与Illumina和Ion Torrent/Proton NGS平台兼容
  • 与多数qPCR仪兼容
 
 
GeneRead Library Quant System为NGS文库制备提供简便的解决方案,确保NGS实验获得可靠结果。GeneRead Library Quant System采用real-time PCR技术,特异性定量检测两端有测序接头的DNA分子。
 
性能
使用两种浓度的NGS文库,将GeneRead Library Quant System的灵敏度和动态范围与Agilent's High Sensitivity DNA Kit进行对比。一个文库使用这两种试剂盒皆可进行定量检测,但浓度低的第二个文库低于Agilent's 2100 BioAnalyzer的低检测阈限。相反,GeneRead Library Quant Array能够对这两种不同浓度的文库进行成功的定量检测。
原则

准确定量文库对于NGS平台的高效使用十分重要。但是,当前的分光广度法只能检测总核酸浓度。GeneRead Library Quant System则采用real-time PCR技术,仅定量检测两端有接头的DNA分子。只有两端有接头的DNA分子才能在乳液PCR(Ion Torrent)或桥式PCR(Illumina)中得到扩增,因此此方法能够准确定量检测可扩增的文库DNA。real-time PCR灵敏性高,能够定量检测低浓度文库,甚至是浓度低于传统分光光度法的检测阈限。

GeneRead Library Quant System提供管装和芯片规格,经过优化,适合配合GeneRead qPCR SYBR Green Mastermixes使用,具有出色的灵敏性和宽泛的动态范围。两种规格都提供适合Illumina或Ion Torrent平台的DNA标准品。芯片规格提供分装的5个浓度的10倍梯度稀释标准品,混合有PCR引物,一式三份。确保您的样本文库在检测范围之中。

流程

芯片工作流程使用两个10倍稀释的样本文库,确保其浓度在梯度稀释的DNA标准品检测范围内。将样本与Generead qPCR SYBR Green Mastermix混合,等分为三份,加入芯片中。进行PCR,将原始CT数据导出至提供的数据分析Excel文件中,进行文库浓度的自动计算(Illumina)或模板稀释因子计算(Ion Torrent/Proton)。

管装标准品的工作流程与芯片的工作流程相似,仅有少数不同。先制备5个10倍梯度稀释的DNA标准品,以及2个10倍梯度稀释的样本文库。这样可确保文库的浓度在标准品稀释液范围之内。下一步,将稀释的DNA标准品和样本文库与提供能够的PCR试剂和相应的GeneRead qPCR SYBR Green Mastermix混合。进行PCR,将原始CT数据导出至提供的数据分析Excel文件中,进行文库浓度的自动计算(Illumina)或模板稀释因子计算(Ion Torrent/Proton)。

应用
GeneRead Library Quant Array和GeneRead Library Quant Kit能够在使用Illumina或Ion Torrent/Proton NGS平台测序前,快速、准确的检测样本文库浓度。

 

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