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产品名称

QuantiTect Reverse Transcription Kit试剂盒

产品型号
QuantiTect Reverse Transcription
所属分类
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产品描述

QuantiTect Reverse Transcription Kit试剂盒

 

快速合成cDNA,进行两步法real-time RT-PCR,用于基因表达分析

  • cDNA合成和gDNA去除仅用20分钟完成
  • 即便是低丰度的转录本也能获得高产量的cDNA
  • 转录本的5'和3'端区域都可以进行cDNA合成
  • 无需设计RNA特异性引物或探针

 

QuantiTect Reverse Transcription Kit通过方便快速的操作过程进行cDNA合成,并有效去除基因组DNA。应用gDNA Wipeout Buffer可高效去除RNA样本中的基因组DNA污染。QuantiTect Reverse Transcription Kit提供所有快速、高效逆转录所需的组分,包括Quantiscript Reverse Transcriptase、Quantiscript RT Buffer和独特的RT Primer Mix。合成的cDNA经过优化可用于real-time PCR,实现对mRNA转录本所有区域的靶分子进行可靠的定量检测。

性能

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因组DNA污染物可使用独特的gDNA Wipeout Buffer迅速有效的去除。去除基因组DNA对于准确的基因表达结果非常重要,而并不总是可以设计RNA特异性引物或探针。使用gDNA Wipeout Buffer可节省时间和费用,因为纯化RNA样品过程中或纯化后均无需另外采用DNase消化。

Quantiscript Reverse Transcriptase的高RNA亲和性配合Quantiscript RT Buffer可从各种RNA模板中获得高产量cDNA(见表“低丰度转录本可获得较高产量的cDNA”)。即使复杂的模板也能成功逆转录,如GC含量高或有复杂二级结构的模板。

低丰度转录本可获得较高产量的cDNA
  IL12A的CT值 
(低表达)
IL1RN的CT
(高表达)
Input RNA (ng) QIAGEN Supplier AII QIAGEN Supplier AII
1000 30.9 32.0 23.1 24.9
100 34.2 35.4 26.3 26.6
10 37.8 46.8 29.7 30.3
1 N.D. N.D. 32.4 34.5
使用不同量的RNA对IL12A和IL1RN 进行两步法Real-time RT-PCR分析。使用 QuantiTect Reverse Transcription Kit或是来自Supplier AII的试剂盒对总RNA逆转录。在ABI PRISM 7900上使用QuantiTect Probe PCR Kit对合成的cDNA进行分析,运用QuantiTect Gene Expression Assays分析IL12A或IL1RN。QIAGEN试剂盒得到的CT值更低,特别是培养基丰富的IL12A基因(加粗),表明cDNA产量高。N.D.: Not detected.

RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,甚至可从5'区域开始。与其他供应商提供的试剂盒相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA,无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域,检测低丰度的基因也具有更高灵敏度。同时,QuantiTect Reverse Transcription Kit也确保了real-time RT-PCR结果更好的重复性。

原理

QuantiTect Reverse Transcriptase是Omniscript和Sensiscript Reverse Transcriptases的新型混合物,对RNA具有高亲和性,可从各种含量的RNA(10 pg到1 µg)合成cDNA。与其他供应商提供的试剂盒相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA,无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。即使复杂的模板也能成功逆转录,如GC含量高或有复杂二级结构的模板。QuantiTect RT Buffer已经过优化,可与real-time PCR缓冲液兼容。

为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果,很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此,在某些特殊情况下(如:cDNA来自一个单外显子基因),起始RNA样品必须无基因组DNA。使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因组DNA污染物可使用独特的gDNA Wipeout Buffer迅速有效的去除。使用gDNA Wipeout Buffer可节省时间和费用,因为纯化RNA样品过程中或纯化后均无需另外采用DNase消化。另外,不需要设计RNA特异性引物或探针。

QuantiTect Reverse Transcriptase Kit的组份
组份 优势
gDNA Wipeout Buffer 在real-time RT-PCR时仅检测RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase 适用的RNA起始量范围(10 pg到1 µg RNA)
灵敏度高
Quantiscript RT Buffer 处理复杂模板
RT Primer Mix 对转录本的各个区域,包括5'区进行cDNA合成
 
操作流程

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应,因此操作过程快速且方便。

QuantiTect Reverse Transcription Kit包括快速合成cDNA所需的所有组分。纯化的RNA只需简单地与gDNA Wipeout Buffer孵育,即可有效去除污染的基因组DNA。与其他的方法相比,使用Quantiscript Reverse Transcriptase、Quantiscript RT Buffer和RT Primer Mix制备的预混液可将RNA样品直接进行逆转录。使用Quantiscript Reverse Transcriptase,即使具有复杂的二级结构的RNA也可在低温下转录,确保RNA保持完整:整个反应都在42°C下完成,并在95°C失活。不需要RNA变性、引物退火和RNase H消化。

应用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样本中合成cDNA,以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR。样本类型包括激光显微切割样本和活组织切片。

 

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